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    免疫磁珠细胞分选过程中常见问题及注意事项
    浏览次数:8070 发布日期:2015-04-13

    细胞分选是细胞生物学、分子生物学最重要的技术方法及必要前提,根据细胞的类型及后续试验目的,目前技术比较成熟且应用较广泛的主要有:密度梯度离心法、免疫密度离心法、免疫磁珠法和流式技术等。随着科技的不断进步,相信各种方法越来越完善,同时一些新的方法也在研究之中,如微芯片CHIP技术。

    其中,免疫磁珠技术因具有特异性好、灵敏度高、分选速度快、使用方便、成本低、应用广等特点,自应用推广以来受到广泛而大量的应用,目前已经成为最主要的细胞分选方法。常见问题及注意事项如下。

    免疫磁珠技术的原理:

    1、基于抗体对抗原的特异性识别;

    2、磁性微珠直接或者间接偶联在抗体上,从而与细胞相连进行标记(如下图);

         

    3、在高强度、梯度磁场中标记的细胞被磁性吸附,未标记细胞首先流出,然后洗脱被吸附的细胞(阳性分选)达到细胞磁性分离的目的。




    免疫磁珠细胞分选过程中常见问题

    1、都能分选哪些细胞?

    答:理论上可以分选所有的细胞,但需要根据所分选细胞的特性开发出相应抗体的磁珠。实际上,目前市场上已经进行能够购买到几乎所有常用的细胞分选磁珠。

    2、需要哪些设备和试剂耗材?

    答:需要的设备有:分选器(提供磁场)、分选架(为分选器提供支撑的支架);所需耗材有:分选柱(细胞分离及洗脱的容器)和磁珠。根据分选方式、分选量以及操作方式可选多种类型分选器Mini免疫磁珠细胞分选仪、Midi免疫磁珠细胞分选仪、Mini&Midi免疫磁珠细胞分选仪、 Super 免疫磁性细胞分选仪、 Vario 免疫磁性细胞分选仪以及autoMACSTM Pro全自动免疫磁珠分选仪等),其中手动方法分选最常用的的是Mini&MidiMACS分选器,autoMACSTM Pro全自动免疫磁珠分选仪则大量应用于医院等大量分选细胞的单位。

    3、分选柱是否可重复使用?

    答:分选柱属耗材,不可永久重复使用,可处理后重复使用2-5次。处理方法:将长试管注满PBS,回抽柱子的活塞,倒出回抽液。倒入新的PBS,打出之;重复两次---此时基本上将柱子内的杂细胞除尽。再抽、打两三次无水酒精或95%酒精,然后置于50-60度烘箱,过夜,即能防止生锈。

    4、一支分选柱能分选多少细胞?

    答:根据柱子种类不同,具体能分选的细胞数目同,基本数量应在1071010间。详细信息参考说明书材料。

    5、一瓶磁珠能使用多久?或能分选多少细胞?

    答:一瓶2ml装大约可以分选109个细胞。

    6、分选的细胞纯度是多少?

    答:良好的实验条件及正确的操作下,一般的纯度都在90%以上。

    7、一次分选所需时间?

    答:手动操作在30分钟内可完成分选,自动分选2.5-10分钟即可。

    8、分选后的细胞可以进行哪些应用?

    答:分选后,不活化细胞,不改变细胞功能,分选细胞活性好,则可用于进一步的细胞培养或细胞与分子水平的分析。

     免疫磁珠细胞分选过程中注意事项:

    1、待分选细胞中如有贴壁细胞,建议在分选前先贴壁培养去除,或者提高EDTA浓度。

    2、抗体包被磁珠对死细胞常有非特异性结合。因而分选前去除死细胞。

    3、新鲜分离骨髓细胞,先用胶原酶、DNA酶、胰酶联合消化,可使细胞团块解聚,从而提高分离效率。

    4、上分离柱前,充分振荡,混悬细胞,打散细胞团块。

    5、用分离柱分选,应用真空抽滤水,减少水中气泡,使分离柱不被气泡阻滞。

    6、细胞悬液加入分离柱中时,应将滴管伸至底壁后加入,避免将细悬液沿管壁流入,使管壁残流末分选细胞,以致后继洗柱过程中,因疏忽末被洗下,最后导致纯度不高。洗柱时,应在前次液体充分流尽后,再加洗液。

    7、分选细胞量应根据说明书控制,不超量。

    8、孵育时间和温度应按说明书进行,延长孵育时间、提高温度会增加非特异结合。

    9、先用抗体阻断Fc受体,可降低非特异性结合。

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